Il metodo ELISA è un test che viene utilizzato nel campo dell'immunologia e in altri campi scientifici per individuare gli anticorpi e gli antigeni. ELISA è l'acronimo di enzyme-linked immunosorbent assay , che si riferisce al fatto che gli anticorpi accoppiati agli enzimi sono utilizzati per determinare i risultati del test. Il metodo ELISA è utilizzato in medicina per la ricerca di anticorpi per le malattie come una misura di diagnostica, ed è una tecnica comune nel campo della ricerca immunologica e biochimica.

Il test ELISA è stata sviluppata negli anni 1960 e 1970 in sostituzione immunologici test che ha coinvolto l'uso di anticorpi radioattivi e di antigeni. Rischi legati all'uso di materiali radioattivi reso il processo di test ingombranti pericolosi, e l'avvento del metodo ELISA risolvere entrambi i problemi. Invece di utilizzare materiali radioattivi per determinare i risultati di un test, il test ELISA utilizza enzimi che reagiscono con gli anticorpi per formare i prodotti colorati. Lo sviluppo di colore in un test ELISA indica un risultato positivo.

Ci sono diversi tipi di test ELISA. Il metodo ELISA più comunemente utilizzato è chiamato ELISA indiretta; Questo è un test degli anticorpi utilizzati per determinare se un certo tipo di anticorpi è presente in un campione, e in quale concentrazione. In medicina diagnostica, questo test è utilizzato per rilevare la presenza di anticorpi contro le malattie infettive come l'HIV, l'epatite, e altri. La presenza di anticorpi a queste malattie indica che l'individuo in fase di test è stato esposto agli agenti infettivi. Tipicamente, il campione utilizzato è di sangue di un paziente.

In questo test, una specifica proteina antigene viene utilizzato per rivestire un piatto microtitolazione. Questo piccolo e piatto di plastica contiene 96 pozzetti piccoli, e un test ELISA singolo può essere effettuata in ogni pozzetto. L'antigene utilizzato per un determinato test dipende dal tipo di anticorpi la prova sta cercando di individuare. Ad esempio, se il test ELISA viene utilizzato per un test per l'HIV, l'antigene utilizzato sarebbe specifico per questo virus.

nel corso del saggio, piccole quantità di campione sconosciuto sono aggiunti a ciascun pozzetto della piastra di microtitolazione , e la piastra viene incubata per dare il tempo di anticorpi nel campione di legarsi all'antigene. Successivamente, un anticorpo secondario di rilevazione si aggiunge a ciascun pozzetto della piastra. Se il campione contiene qualsiasi del tipo di anticorpo che è in fase di sperimentazione per l', che si legano alla anticorpo secondario di rilevazione durante il successivo periodo di incubazione.

La chiave per il metodo ELISA è che l'anticorpo secondario è marcato con un particolare tipo di enzima. L'enzima utilizzato è in grado di cambiare il colore del campione di prova quando reagisce con il suo substrato. Pertanto, se un campione contiene degli anticorpi in fase di test per, aggiungendo il supporto a un pozzo la farà a cambiare colore, a causa della presenza di anticorpo secondario e il suo enzima associato.

Ci sono altre variazioni sul metodo ELISA, compreso un test chiamato il sandwich ELISA. Questo è usato per rilevare gli antigeni in un campione, piuttosto che gli anticorpi. In questo test, la piastra di microtitolazione è rivestita con un campione standard di anticorpi. Successivamente, il campione di antigene viene aggiunto, seguito con l'aggiunta dell'anticorpo secondario l'individuazione e il suo enzima associato. Come con la indiretta ELISA, la formazione di un prodotto colorato indica un risultato positivo.